Presentation of the precision tissue sectioning technique for studying infections and co-infections on complex tissues cultured ex vivo
Présentation de la technique de coupes de précision de tissus permettant l'étude d'infections et co-infections sur des tissus complexes cultivés ex vivo
Résumé
In this paper, we describe a technique that allows getting slices of biological tissues followed by their in vitro culture and infection. Some slices made on pulmonary tissues are presented in order to study the immunologic response to viral respiratory diseases of pigs. This technique of tissue slices’ culture can also be used to study the tissue metabolism or its response to toxic in various organs (1, 2, 3, 4, 5, 6). The lung tissue is complex and infection studies using cell lines do not take into account the tissue architecture and the diversity of its cell component. When studying lung infection or co-infection, it is important to perform a number of replicates, according to the measured traits, for the statistical analysis of results. This technique can be an alternative to in vivo experiments. It conforms to the 3R standards: « reducing » the number of animals, « refining» the experimental protocol, and replacing when possible animal experiments through ex vivo methods. We got a « Tissue slicer » device that allows getting “Precision Cut Lung Slices” (PCLS) representative of the tissue multicellular complexity and that allows studying extracellular interactions in the pulmonary tissue. In these slices the tissue architecture and cell interactions are partially preserved as well as their molecular capacities and functional heterogeneity thus allowing the follow up of the immunological response with a tissue viability of one or two weeks, which allows studying infections and coinfections (7, 8).
Cet article présente une technique permettant d’obtenir et de cultiver in vitro des coupes (slices) de tissus biologiques. Des coupes réalisées sur du tissu pulmonaire dans le but d’étudier la réponse immunitaire aux infections respiratoires virales porcines sont plus particulièrement présentées. La technique des tranches tissulaires rapportée ici peut également être utilisée pour étudier le métabolisme et la réponse de différents types d’organes à d’autres agents pathogènes ou à des composés toxiques (1, 2, 3, 4, 5, 6). L’étude des interactions hôte-pathogènes sur des lignées cellulaires ne prend pas en compte la complexité du tissu pulmonaire et la diversité de ses composants cellulaires. Lors d’études d’infections ou co-infections pulmonaires, il est important d’avoir un certain nombre de « replicates » afin de pouvoir effectuer une analyse statistique des résultats. Les techniques de cultures de coupes de précision sont une alternative à l’expérimentation animale et s’inscrivent dans le respect de la règle des 3R : « réduire » (le nombre d’animaux utilisés), « raffiner » (les conditions expérimentales) et « remplacer » lorsque c’est possible par des techniques in vitro ou ex vivo. Nous avons acquis un appareil « Tissue slicer » permettant d’obtenir des coupes de précision de tissu (PCLS) qui, mises en culture, prennent en compte l’architecture du tissu et permettent l’étude in situ des interactions cellulaires au niveau du tissu pulmonaire.
Ces coupes (slices) conservent en partie les capacités moléculaires et l'hétérogénéité fonctionnelle du tissu permettant l'évaluation de la réponse immunitaire dans un cadre qui se rapproche des conditions in vivo avec une viabilité d’une à deux semaines, permettant l’étude d’infections et de co-infections (7, 8).
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